正确使用多肽眼霜对于发挥其最佳效果至关重要。在使用前，需先清洁眼部肌肤，可使用温和的眼部卸妆产品卸除眼妆，再用清水洗净，然后用毛巾轻轻按压吸干水分。取适量多肽眼霜，一般米粒大小即可，点涂在眼周肌肤上，注意要涂抹在眼周肌肤的骨眼窝处，从内眼角开始，沿着下眼眶向外眼角方向轻轻涂抹，再涂抹上眼皮，动作要轻柔，避免拉扯眼部肌肤。涂抹后，用无名指指腹轻轻按摩眼周肌肤，按照从内眼角到外眼角的方向，轻轻点按、提拉，促进眼霜的吸收。按摩时力度要适中，一般按摩 3 - 5 分钟，直至眼霜完全被皮肤吸收。​

使用多肽眼霜有一些注意事项。首先，对蛋白类物质过敏的人群在使用前应进行皮肤过敏测试，将少量眼霜涂抹于耳后或手臂内侧，观察 24 小时，若出现红肿、瘙痒等过敏症状，则不可使用。其次，多肽眼霜应存放在阴凉、避光处，避免高温和阳光直射，以免影响多肽等成分的活性。在使用过程中，若眼部肌肤出现不适或过敏反应，如刺痛、红肿等，应立即停止使用，并及时咨询专业皮肤科医生的建议。此外，要注意使用频率，一般早晚各使用一次即可，过度使用可能会导致眼部肌肤营养过剩，引发脂肪粒等问题。